一、项目介绍
免疫组织化学IHC。
肿瘤一般流程，做HE常规染色，确认后进行针对性IHC检测分析。
不同项目的染色位置不同，分为：核染，膜染和浆染。
二、乳腺癌案例
三种成因，对应三种检测对象：
1.Her2，可采用罗氏靶向治疗药物赫塞丁针对性治疗。
2.ER，主要因激素等原因导致的乳腺癌，术后通过调节内分泌有效治疗方法。
3.PR，主要因激素等原因导致的乳腺癌，术后通过调节内分泌有效治疗方法。
4. 三阴，以上三种测试结果均为阴性的肿瘤，原因不详，可能与转移有关，严重程度高。
三、检测流程
1. 术后标本首先通过甲醛浸泡脱水，两方面：
1.1 防止细菌滋生使标本腐烂
1.2 防止组织细胞内酶渗透出细胞壁，破坏细胞形态。
2. 包埋，将标本用蜡包埋，便于保存和切割。
3. 切片，将组织切片，2~3微米，用于测试。
3.1 切片机包含手动和自动，手动切片机内部通过钢丝绕线，手动转动过程进行拉伸。提供2~5微米调节旋钮。
3.2 自动切片机，原理不详，不排除齿轮方案。只提供特定厚度切换。
4. 上机脱蜡，由于蜡侵入组织，反应试剂无法进入，因此必须先脱蜡后才能反应。
4.1 设置温度80度。
4.2 4分钟清洗一次，清洗过程为：加-吹-加。
4.3 由于溶解蜡的液体性能一般，需要多次清洗。
5. 抗原修复，甲醛固定时会将位点粘连，导致无法与一抗结合，因此需要将位点打开，使用抗原修复液高温修复。
5.1 高压锅方案温度达到121度左右，手工常规方式。
5.2 一般采用三种方式修复：化学方法，微波方法和加热方法。设备采用化学（抗原修复液和加热组合方式）
5.3 上机95摄氏度方案同121度方案偏差不大。
5.4 干片问题，如果出现干片，容易导致组织皱缩，影响最后的组织观察。
5.5 ER种类包括三种：PBS（缓冲液，ph7，磷酸盐成分，容易结晶且难以去除，可使用84消毒液或冰乙酸溶解，容易使长菌，5天左右可出现蓝-藻类、深色半点-霉菌）、CBS（ER1，ph6）、EDTA（ER2，ph9）
6. 添加ER过程中需要补液，由于抗原修复液中含有水和特殊物质，水沸点低，补液过程特殊物质浓度逐渐增加且残留在玻片上，因此需要pbs进行单独清洗。
7. 双氧水，修复后的组织上存在一些类源性过氧化物酶，该物质同HRP使DAB显色，影响判断，因此通过双氧水使之灭活。
8. 一抗，与组织上的抗原结合。
8.1 注：此时干片将导致一抗试剂附着在组织上，清洗步骤难以清洗导致非特异性显色。
8.2 由于一抗试剂量较少，控制时间和温度。20~30度。低于20度将减缓反应速度。温度过高（40或更高）将使期失活。
9 二抗、与已结合的一抗结合。
10. 三抗，一端与二抗结合，另外一段包含辣根HRP，能够使侵入的dab显色。
11. dab，将标记待测物（三抗），配置dab的成分为色源和双氧水，需要提前配置和充分搅拌。
11.1 对于大量dab配置时，可采用分层吸排的搅拌方案。
12. 苏木素，紫红色，用于对细胞形态进行染色。如果试剂环境存在温差（不能加热）将出现沉淀。
13. 返蓝，可通过加特殊试剂（或自来水冲洗，含氯），加速苏木素变色，变为天蓝色。便于显微镜观察。
14. 透明，使用酒精清洗将玻片中的水互溶，并蒸发带走，封片使用的中性树脂和二甲苯不溶于水，封片容易出现气泡和分层。影响观察。
15. 封片，加中性树脂和盖玻片。
三、试剂篇
脱蜡液：用于将组织上的蜡去除，腊熔点60度。
抗原修复液，用于将组织上被甲醛粘连的位点打开。
一抗：CD-3，在甲状腺肿B淋巴细胞，上包含该物质，将该物质打入小鼠体内产生抗体，作为CD-3一抗试剂。用于检测组织上是否存在CD-3。
二抗：一抗抗体，可以与一抗结合。作用：放大。
三抗：二抗抗体并携带用于激发DAB显色的HRP，可以与二抗结合。作用：放大和显色
DAB：染色液，被三抗激发显色。
苏木素：对细胞常规形态进行染色，原色紫红，反蓝后天蓝色。
酒精：透明，将组织上水分带走，避免封片时中性树脂和水不溶解产生气泡或隔层。