生物的东西必须要主动去了解，否则视野容易受到限制，尤其是分子生物学的核心技术。
PCR - 聚合酶链式反应
The Complete Guide to PCR (How it Works, Primer Design, and Running Reactions) - YouTube
目的：从DNA双链中扩增出感兴趣的区段，用于后续的研究。
原理：DNA结构，双螺旋，AT、GC配对；DNA双链在临界温度会解链，退火后又会恢复；引物，DNA复制的起点，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已有的DNA链上。
操作核心：wiki上很全面
1. 引物设计，会考虑GC含量，决定退火温度；
2. 变性、退火和延伸；
PCR的应用 - PCR Applications—Top Seven Categories
- Gene expression
- Genotyping (detection)
- Cloning
- Mutagenesis
- Methylation analysis
- Sequencing
- Medical, forensic, and applied sciences
问题：
1.真核生物的组蛋白会影响PCR吗？
2.为什么需要前后引物，前后引物是如何p出指定区段的？
3.PCR、qPCR和RT-PCR之间的区别和联系？
PCR - 任何核酸序列
RT-PCR 逆转录聚合酶链式反应 - 分析的是RNA，大部分是基因表达
逆转录PCR，就是PCR的一个常规应用，我也跑过，见过庞大的机器，也是先设计引物，然后提cDNA，定量。
一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板透过PCR进行DNA复制。
PCA我们是扩增DNA序列，而RT-PCR我们扩增的是反转录出来的cDNA序列，然后再做PCR，把量做上去来检测，通常会配上一些管家基因作为对照。
RT-PCR的数据分析可以参照Y数微信公众号，代码很详细。
qPCR (Quantitative Real-time PCR) 实时荧光定量PCR - 分析的是DNA
实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
总结：
- PCR是一切的鼻祖，即通过控制温度+底物原料，来复制核酸序列
- RT-PCR，RT不是实时定量，而是反转录，第一步就是反转录，用于基因表达的检测，就是单基因的RNA-seq
- qPCR，实时定量，我们常见的新冠核酸检测、肿瘤基因检测等，都是qPCR，看有没有指定核酸片段